單細胞測序已逐漸成為科研熱點，它解決了用組織樣本測序或樣本少時無法解決的細胞異質(zhì)性難題,為科學(xué)家研究解析單個細胞的行為、機制、與機體的關(guān)系等提供了新方向。但是單細胞測序遇到的第一個難題就是:"如何獲取單細胞?”

　　1.有限稀釋法(Limiting Dilution)有限稀釋法是根據(jù)細胞懸液濃度的計算,逐步稀釋得到一定體積內(nèi)只有1個或少量細胞的方法(一般為1 ul,多數(shù)WGAWTA試劑盒可容納投入體積)。該訪法操作簡單，無需特殊設(shè)備。但是，由于分選基于濃度計算，無法直接觀察，容易出現(xiàn)錯誤。

　　2.顯微操作法(Micromanipulator)

　　顯微操作法是將細胞懸液置于顯微鏡下進行單細胞挑選的方法，細胞挑選過程更直觀。低配版顯微操作，可以使用口吸管(英文名:Aspirator tube assembly)來進行;如果有經(jīng)濟實力的客戶，可以使用顯微操作臺進行操作。首先，需要將細胞懸液進行稀釋,濃度在20個細胞每微升為宜。吸取細胞時，細管內(nèi)不能有太多的緩沖液,保證毛細管內(nèi)液體在1ul左右。然后將毛細管內(nèi)液體吹入反應(yīng)管中,反應(yīng)管中預(yù)先加入的4 u|裂解液,這一過程切忌產(chǎn)生氣泡。顯微操作的優(yōu)勢在于能夠準確地控制單細胞的吸取與釋放;其缺點在于通量低，對操作人員的技術(shù)要求高。

　　3.熒光流式分選(FACS)

　　熒光流式分選能夠很好的實現(xiàn)大量細胞的分選過程，齟能夠做到精度高、通量大。但是它要求的細胞數(shù)量多,需要的樣本初始體積較大，使一些小體積或微量樣本(如細針穿刺液)分離細胞受到了制約。該訪法需要配備具有分選功能的流式細胞儀。在進行流式分選的過程中，需要先將樣本制成細胞懸液。不同形式的樣品，制作細胞懸液的方法也有所不同。

　　我們最為常見的樣本類型有:新鮮實體組織、外周血單核細胞(PBMC)及培養(yǎng)細胞等。中，新鮮實體組織需要經(jīng)過酶解法、機械法或者化學(xué)處理法等方法進行細胞分散，制作細胞懸液。在制作細胞懸液的過程中需要注意:①無菌操作;②操作過程要迅速;③染色和固定避免對細胞產(chǎn)性傷害;④在分選前進行細胞計數(shù)和活性統(tǒng)計。